RESUMO Basidiósporos do fungo ectomicorrízico Pisolithus microcarpus apresentam parede celular impermeável, característica possivelmente relacionada às baixas porcentagens de germinação desses propágulos, o que dificulta a obtenção de monocários e a utilização desses esporos em inoculantes. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de diferentes concentrações de água sanitária comercial na permeabilização dos basidiósporos de P. microcarpus e analisar as alterações causadas na ultraestrutura da parede celular, na viabilidade e na capacidade germinativa desses propágulos. Basidiósporos fúngicos foram coletados em plantações de eucalipto e permeabilizados utilizando-se diferentes concentrações de água sanitária e tempos de exposição. Os basidiósporos foram então analisados por microscopia eletrônica de varredura e de transmissão. A porcentagem de basidiósporos permeabilizados variou com a marca comercial, concentração de água sanitária e o tempo de exposição. Basidiósporos de diferentes basidiocarpos diferiram na suscetibilidade ao tratamento de permeabilização com água sanitária. Alterações da ultraestrutura dos basidiósporos permeabilizados foram observadas nas concentrações de 15 e 50 % de água sanitária pelo tempo de exposição de 40 s, com mudanças de superfície e perda das espículas da camada mais externa da parede. Após a permeabilização com água sanitária a 5 % por 40 s, 80 % dos esporos permeabilizados encontravam-se viáveis, resultando na produção de colônias fúngicas após 15 dias de incubação desses propágulos na presença de Corymbia citriodora. No entanto, a porcentagem de germinação obtida: 0,001%, foi semelhante à de basidiósporos não-permeabilizados, indicando que outros fatores, além da permeabilidade da parede celular, são determinantes para o processo de germinação.

ABSTRACT Basidiospores of the ectomycorrhizal fungus Pisolithus microcarpus have an impermeable cell wall, a characteristic that is possibly related to the low germination percentages of these propagules, which makes it difficult to obtain monokaryons and use these spores in inoculants. The objective of this study was to evaluate the effect of different concentrations of commercial bleach on the permeabilization of P. microcarpus basidiospores and to analyze the alterations caused in the cell wall ultrastructure and the viability and germination capacity of these propagules. Fungal basidiospores were collected in eucalyptus plantations and permeabilized using different bleach concentrations and exposure times. The basidiospores were then analyzed by scanning and transmission electron microscopy. The percentage of permeabilized basidiospores varied with the commercial brand, bleach concentration, and exposure time. Basidiospores of different basidiocarps differed in susceptibility to permeabilization treatment with bleach. Changes in the ultrastructure of permeabilized basidiospores were observed at bleach concentrations of 15 and 50 % for an exposure time of 40 s, with surface changes and loss of the spicules of the outermost layer of the wall. After permeabilization with 5 % bleach for 40 s, 80 % of the permeabilized spores were viable, resulting in the production of fungal colonies after 15 days of incubation of these propagules in the presence of Corymbia citriodora. However, the germination percentage obtained, 0.001 %, was similar to that of non-permeabilized basidiospores, indicating that other factors, besides cell wall permeability, are determinant for the germination process.

ABSTRACT Phytostimulation plays a key role in the process of rhizodegradation of herbicides in soil. Additionally, bio-enhancement associated with phytoremediation may increase the efficiency of the decontamination process of soils with herbicides. Therefore, the objective of this study was to evaluate the biomass and microbial activity of soil contaminated with sulfentrazone and cultivated with phytoremediator species plus a bacterial consortium. The experiment was conducted in a greenhouse, carried out with a 2 × 4 × 4 completely randomized factorial design with 4 replications. The first factor consisted of the presence or absence of bio-enhancement with a bacterial consortium composed of Pseudomonas bacteria; the second factor consisted of a monoculture or mixed cultivation of 2 phytoremediator species Canavalia ensiformis and Helianthus annuus, besides the absence of cultivation; the third factor was made up by the bio-remediation time (25, 45, 65, and 85 days after thinning). Uncultivated soils displayed low values of microbial biomass carbon and microbial quotient as well as high values of metabolic quotient throughout the bio-remediation time, indicating the importance of cultivating phytoremediator species for the stimulation of soil microbiota. Bio-enhancement with the bacterial consortium, in general, promoted an increase in the microbial biomass and activity of soil contaminated with sulfentrazone. In the presence of the bacterial consortium, Canavalia ensiformis stimulated a greater activity of associated microbiota and supported a higher microbial biomass. Phytoremediation associated with microbial bio-enhancement are thus promising techniques for the bio-remediation for soils contaminated with sulfentrazone. This technique enhances the biomass and activity of soil microorganisms.

RESUMO A inoculação de micro-organismos solubilizadores de fosfato, em conjunto ou não com fungos micorrízicos, pode ser alternativa para a redução dos custos de produção de eucalipto por meio da diminuição dos gastos com fertilizantes fosfatados. Dessa forma, objetivou-se com este trabalho isolar e caracterizar bactérias solubilizadoras de fosfato da rizosfera de Eucalyptussp., visando à sua coinoculação com fungos ectomicorrízicos. Entre os 24 isolados de bactérias originários do solo rizosférico de eucalipto, 12 são do filo γ-Proteobacteria e pertencentes à família Enterobacteriaceae (Enterobacter, Kluyvera e Klebsiella); 9 do filo β-Proteobacteria (Burkholderia); 1 do filo Actinobacteria (Curtobacterium); e 1 do filo Firmicutes (Enterococcus). O índice de solubilização de fosfato, calculado dividindo-se o diâmetro do halo de clareamento pelo diâmetro da colônia, variou de 0 a 11, sendo Enterococcus avium a espécie com o maior potencial de solubilização de CaHPO4in vitro. A produção de acidez em meio glicose-extrato de levedura pelos isolados bacterianos rizosféricos foi significativa, no entanto a capacidade de solubilização de CaHPO4 não se correlacionou com a acidificação do meio. Alguns isolados bacterianos promoveram forte inibição do crescimento de Pisolithus sp., isolado H4111, enquanto outros não causaram esse fenômeno. Os isolados RE 56 (Enterococcus avium), RE 41 (Burkholderia cepacea), RE 52 e RE 30 (ambos Burkholderia pyrrocinia) foram aqueles que apresentaram maior potencial para utilização em experimentos de coinoculação com fungos ectomicorrízicos.

ABSTRACT The inoculation of phosphate solubilizing microorganisms, with or without mycorrhizal fungi, can be an alternative to reduce de production costs of eucalyptus due to the decrease in phosphate fertilization spending. Thus, the objective of this work was to isolate and characterize phosphate solubilizing bacteria from the rhizosphere of Eucalyptus sp. aiming their co-inoculation with ectomycorrhizal fungi. Among the 24 isolates of bacteria originating from the rhizosphere soil of Eucalyptus, 12 are from phylum γ-Proteobacteria belonging to the family Enterobacteriaceae (Enterobacter, Kluyvera and Klebsiella); 9 from β-Proteobacteria (Burkholderia); one from Actinobacteria (Curtobacterium) and one from Firmicutes (Enterococcus). The phosphate solubilization index, calculated by dividing the diameter of the halo of bleaching by the diameter of the colony, ranged from 0 to 11, with the species Enterococcus avium showing the greatest potential to solubilize CaHPO4 in vitro. The production of acidity in the Glucose-Yeast Extract media by the rhizosphere bacterial isolates was significant, however, CaHPO4 solubilization ability is not correlated with the acidification of the medium. Some bacterial isolates promoted strong inhibition of growth of Pisolithus sp., isolate H4111, while others did not cause this phenomenon. The isolates RE 56 (Enterococcus avium), RE 41 (Burkholderia cepacea), RE 52 and RE 30 (both Burkholderia pyrrocinia) were those which showed the highest potential for utilization in co-inoculation experiments with ectomycorrhizal fungi.

O uso de fosfatos naturais, aliado ao adequado manejo de microrganismos do solo solubilizadores de fosfato, é uma alternativa para reduzir os custos da adubação fosfatada. No entanto, ambas as práticas requerem a avaliação prévia do potencial da microbiota rizosférica em solubilizar fontes de P pouco reativas em condições de campo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial da microbiota do solo de solubilizar os fosfatos de Ca, Fe, Al, além dos fosfatos naturais de Araxá e Catalão em amostras de solo rizosférico e não rizosférico de plantio do hibrido Eucalyptus grandis × E. urophylla, localizados em três pontos de uma topossequência típica da Zona da Mata de Minas Gerais. Adicionalmente, avaliou-se a atividade de fosfatases ácidas e alcalinas sob as mesmas condições experimentais. A microbiota rizosférica das plantas do topo e da baixada apresentou maior potencial de solubilização de fosfato de Ca (5.745,09 e 6.452,80 μg de P, respectivamente), enquanto o solo da encosta não apresentou diferenças entre as fontes inorgânicas testadas. O fosfato de Catalão foi a fonte de fosfato natural com maior potencial de solubilização (1.209,71 μg de P) pela microbiota do solo nas condições avaliadas. O pH final do meio de cultura correlacionou-se negativamente com os valores de P solubilizado, indicando que a acidificação do ambiente foi um dos mecanismos de solubilização utilizados pela microbiota rizosférica in vitro. A atividade das fosfatases ácida e alcalina foi maior na rizosfera de plantas do topo, área com maior teor de matéria orgânica. Não foi observada correlação clara entre o potencial de solubilização de fosfato ou a atividade das fosfatases com o diâmetro médio à altura do peito das árvores do plantio. Este estudo demonstra o efeito da topografia no potencial de solubilização da microbiota do solo, que é influenciada positivamente pelo teor de matéria orgânica do solo.

The use of rock phosphates, combined with proper management of soil microorganisms able to solubilize phosphate, is an alternative for reducing the costs of P fertilization. However, both practices require prior assessment of the potential of the rhizospheric microbiota in solubilizing P sources with low reactivity under field conditions. The objective of this study was to evaluate the potential of soil microbes to solubilize Ca, Fe, and Al phosphates, as well as Araxá and Catalão rock phosphates, in rhizospheric and bulk soil samples from hybrid Eucalyptus grandis × E. urophylla plantations located at three points in a typical toposequence from the state of Minas Gerais. Additionally, we evaluated the activity of acid and alkaline phosphatases under the same experimental conditions. The rhizospheric microbiota of plants from the top of the slope and from the lowland showed higher solubilization potential of Ca phosphate (5,745.09 and 6,452.80 μg P, respectively), whereas the soil from along the slope showed no difference among the inorganic sources tested. Catalão rock phosphate was the natural phosphate source with highest solubilization potential (1,209.71 μg P) by soil microbiota under the conditions evaluated. The final pH of the culture medium was negatively correlated with the values of solubilized P, indicating that acidification of the environment is one of the mechanisms used by soil microbiota in phosphate solubilization in vitro. The activity of acid and alkaline phosphatases was higher in the rhizosphere of plants from the top of the slope, an area with higher organic matter content. No clear correlation between phosphate solubilization potential or phosphatase activity with the average diameter at breast height of trees was observed. This study demonstrates the effect of topography on the solubilization potential of soil microbes, which is positively influenced by the organic matter content of the soil.

Questões referentes à aplicação de herbicidas em pré-emergência das plantas daninhas na cultura do eucalipto merecem destaque devido ao impacto dessa prática no ambiente, principalmente sobre a atividade microbiana do solo e micro-organismos benéficos, como os fungos micorrízicos e os solubilizadores de fosfatos. Objetivou-se estudar o impacto da aplicação dos herbicidas sulfentrazona, isoxaflutol e oxyfluorfem sobre a colonização micorrízica, biomassa e atividade microbiana de dois solos florestais cultivados com eucalipto. O ensaio foi conduzido em casa de vegetação utilizando um solo argiloso e um solo francoarenoso distribuídos em vasos de 12 dm³. O esquema fatorial utilizado foi 4 x 3, sendo três herbicidas (sulfentrazona, isoxaflutol e oxyfluorfem) mais a testemunha e três avaliações (5, 20 e 70 dias após a aplicação - DAA), no delineamento inteiramente casualizado com quatro repetições. Após a aplicação dos herbicidas na dose recomendada para a cultura transplantaram-se as mudas do híbrido de Eucalyptus grandis x E. urophylla. Avaliaram-se a biomassa microbiana, a taxa respiratória do solo, o quociente metabólico e o potencial de solubilização de fosfato inorgânico aos 5, 20 e 70 DAA. Aos 70 DAA verificou-se a colonização micorrízica e a viabilidade de esporos. Os herbicidas sulfentrazona, isoxaflutol e oxyfluorfem, bem como o tempo decorrido da aplicação afetaram os indicadores microbiológicos de maneira diferenciada. No solo franco-arenoso, o sulfentrazona foi mais prejudicial à biomassa microbiana, à colonização micorrízica e aos micro-organismos solubilizadores de fosfato inorgânico. No solo argiloso, no entanto, a aplicação dos três herbicidas não afetou a biomassa microbiana, mas reduziu a colonização radicular do eucalipto por fungos micorrízicos arbusculares e o potencial de solubilização de fosfato inorgânico. O herbicida sulfentrazona se destacou por provocar aumento do número de esporos não viáveis de fungos micorrízicos arbusculares nesse solo.

Questions regarding the application of pre-emergence herbicides for control weeds in eucalyptus are noteworthy due to the impact of this practice on the environment, particularly on soil microbial activity and beneficial micro-organisms such as mycorrhizal fungi and phosphate solubilizers. The aim of this research was to study the impact of applying herbicides sulfentrazone isoxaflutole and oxyfluorfen on mycorrhizal colonization, microbial biomass and microbial activity of two forest soils cultivated with eucalyptus. The trial was conducted in a greenhouse using two soils, one clay and sandy loam distributed in 12 dm³ pots. The 4x3 factorial design was used , with three herbicides (sulfentrazone, oxyfluorfen, isoxaflutole) over the untreated control and three assessments (5, 20 and 70 days after application (DAA)), in a completely randomized design with four replications . After herbicide application seedlings of the hybrid Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla. We evaluated the microbial biomass of the soil respiration rate, the quotient and the metabolic potential of solubilization of inorganic phosphate at 5, 20 and 70 DAA. At 70 DAA verified the percentage of roots colonized by mycorrhizal fungi and spore viability in the soil. The sulfentrazone, isoxaflutole and oxyfluorfen as well as the time of application affected the microbiological indicators differently. In the sandy loam soil sulfentrazone was more harmful to microbial biomass, mycorrhizal colonization and microorganisms solubilizing inorganic phosphate. In clay soil, however, the application of the three herbicides did not affect microbial biomass, but reduced root colonization of eucalyptus by mycorrhizal fungi and the potential solubilization of inorganic phosphate. The sulfentrazone stood for caused an increase in the number of non-viable spores of mycorrhizal fungi in the soil.

Acacia mangium e Mimosa caesalpiniaefolia são fabáceas lenhosas de rápido crescimento cuja tolerância à toxidez por arsênio (As) deve ser estudada para avaliação do potencial de fitorremediação. Assim, este experimento, conduzido em casa de vegetação, objetivou avaliar sintomas de toxidez por As em A. mangium e M. caesalpiniaefolia. Plantas seminais de A. mangium e M. caesalpiniaefolia foram cultivadas por 120 d em uma mistura de Latossolo Vermelho e areia, contaminadas com 0, 50, 100, 200 e 400 mg kg-1 de As. Utilizaram-se quatro repetições distribuídas em quatro blocos casualizados. Foram avaliados os sintomas visíveis de toxidez, a produção de matéria seca, a relação raiz/parte aérea, a anatomia radicular e o acúmulo de As. As análises de variância e de regressão evidenciaram que o crescimento das plantas foi prejudicado pelo As, excedendo 80 % de redução da produção de matéria seca na maior dose. A relação raiz/parte aérea aumentou com a adição de As. Plantas de M. caesalpiniaefolia manifestaram clorose esbranquiçada sob 400 mg kg-1 de As. A anatomia radicular das espécies foi alterada, observando-se células colapsadas, morte de primórdios radiculares e acúmulo de compostos fenólicos. A concentração de As nas raízes foi dezenas de vezes superior à concentração na parte área, excedendo 150 e 350 mg kg-1 na M. caesalpiniaefolia e na A. mangium, respectivamente. Essas espécies apresentaram potencial para fitoestabilização de áreas contaminadas com As, porém devem ser adotadas medidas para promover seu crescimento nesses locais.

Acacia mangium and Mimosa caesalpiniaefolia are fast-growing woody fabaceous species that might be suitable for phytoremediation of arsenic (As)-contaminated sites. To date, few studies on their tolerance to As toxicity have been published. Therefore, this study assessed As toxicity symptoms in A. mangium and M. caesalpiniaefolia seedlings under As stress in a greenhouse. Seedlings of Acacia mangium and M. caesalpiniaefolia were grown for 120 d in an Oxisol-sand mixture with 0, 50, 100, 200, and 400 mg kg-1 As, in four replications in four randomized blocks. The plants were assessed for visible toxicity symptoms, dry matter production, shoot/root ratio, root anatomy and As uptake. Analyses of variance and regression showed that the growth of A. mangium and M. caesalpiniaefolia was severely hindered by As, with a reduction in dry matter production of more than 80 % at the highest As rate. The root/shoot ratio increased with increasing As rates. At a rate of 400 mg kg-1 As, whitish chlorosis appeared on Mimosa caesalpiniaefolia seedlings. The root anatomy of both species was altered, resulting in cell collapse, death of root buds and accumulation of phenolic compounds. Arsenic concentration was several times greater in roots than in shoots, with more than 150 and 350 mg kg-1 in M. caesalpiniaefolia and A. mangium roots, respectively. These species could be suitable for phytostabilization of As-contaminated sites, but growth-stimulating measures should be used.

Culturas monoxênicas de fungos micorrízicos arbusculares (FMAs) em raízes transformadas têm sido utilizadas para melhor compreensão desses fungos, porém, poucas espécies foram estabelecidas in vitro com sucesso. O objetivo do trabalho foi estabelecer culturas monoxênicas de Gigaspora decipiens e Glomus clarum e verificar o efeito da temperatura e pH na produção de esporos. As culturas foram obtidas de esporos desinfestados e germinados em Agar-água. Após a germinação foram transferidos para placas de Petri contendo raízes de cenoura transformadas, em meio mínimo. Após 4 a 6 dias formou-se novos esporos e estruturas típicas. O efeito da temperatura (22, 25, 28 e 32ºC) e pH (4,0; 4,5; 5,5 e 6,5) na produção de esporos foram analisados por 3 meses, obtendo-se curvas sigmoidais. Os esporos aumentaram a partir de 22ºC, atingindo valores maiores em 28ºC e em 32ºC reduziu-se a produção. A maior produção de esporos de G. decipiens ocorreu em pH 6,5, enquanto G. clarum em pH 4,0. O cultivo de outras espécies faz-se necessário visando o conhecimento de aspectos particulares da simbiose até hoje não elucidados, incluindo-se os efeitos dos fatores ambientais sobre a produção dos esporos das diversas espécies de FMAs.

Monoxenic cultures of arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) in transformed roots have been used to better understand the symbiosis with these fungi, but few species have been successfully established in vitro. The object was to establish monoxenic cultures of Gigaspora decipiens and Glomus clarum and to verify the effects of temperature and pH on spore formation. Cultures were established from superficially disinfested spores that were germinated on an agar and water. After germination, the spores were transferred to Petri dishes containing transformed carrot roots. After 4-6 days formed newly formed spores and structures typical. The effects of temperature (22, 25, 28 or 32ºC) and pH (4.0, 4.5, 5.5 or 6.5) on the production of spores were assessed over three months, resulting in sigmoidal growth curves. The spore increased from 22ºC, reaching higher values 28oC and 32oC there was a reduction in the production. The highest spore production of G. decipiens occurred in a pH of 6.5, whereas for G. clarum was pH of 4.0. The cultivation of other species is still necessary to elucidate particular aspects of the symbiosis that so far are unclear, including the effects of environmental factors on the production of spores of different AMF species.

Estudos sobre a ecologia de organismos envolvidos no processo de produção são necessários para o desenvolvimento de uma agricultura sustentável, e hoje, a sustentabilidade está intimamente ligada à rentabilidade de produção. Objetivou-se com este trabalho verificar a ocorrência de fungos micorrízicos arbusculares em plantas daninhas de lavouras brasileiras e avaliar o potencial de solubilização de fosfato inorgânico da microbiota associada. 36 espécies de plantas daninhas foram avaliadas quanto à ocorrência de micorrizas, e 11 foram selecionadas para avaliação do potencial de solubilização total e relativa de fosfato. Todas as espécies apresentaram colonização por micorrizas, inclusive um exemplar da família Brassicaceae, geralmente enquadrada como não micorrizada. Na maioria das espécies, os tipos morfológicos de arbúsculos e enovelados de hifas foram observados, sendo os enovelados mais comuns entre as gramíneas. Fungos endofíticos do tipo dark septate foram visualizados na maioria das plantas. As plantas daninhas apresentaram distintos potenciais de solubilização de P na rizosfera. Amaranthus retroflexus, Bidens pilosa e Leonotis nepetaefolia apresentaram elevados valores de solubilização relativa de fosfato. Este é o primeiro relato de micorrizas e da atividade de solubilização de fosfato em plantas daninhas no Brasil.

Studies on the ecology of the organisms involved in the production process are necessary for the development of sustainable agriculture, and sustainability is currently closely linked to the profitability of production. The objective of this study was to verify the occurrence of arbuscular mycorrhizal fungi in weeds infesting Brazilian crops and to evaluate the inorganic phosphate solubilization potential of the associated microbiota. A total of 36 weed species were evaluated for the occurrence of mycorrhizae; of these, 11 were selected to evaluate their potential for total and relative phosphate solubilization. All of the species demonstrated mycorrhizal colonization, including a member of the Brassicaceae family, which is usually assumed to be non-mycorrhizal. In most of the species, morphological types of arbuscular and coiled hyphae were observed, with the coiled hyphae being the most common in the grasses. Dark septate endophytic fungi were observed in most of the plants. The weeds presented different potentials for P solubilization in the rhizosphere; Amaranthus retroflexus, Bidens pilosa and Leonotis nepetaefolia showed high values of relative phosphate solubilization. This is the first report on the mycorrhizae and phosphate solubilization activity in weeds in Brazil.

A formação de ectomicorrizas por isolados monocarióticos e dicarióticos de Pisolithus microcarpus (Cooke & Massee) G. Cunn. em Eucalyptus grandis W. Hill ex Maid. foi estudada usando-se o método de síntese in vitro em placas de Petri. A formação de ectomicorrizas foi observada para todas as linhagens testadas. Ectomicorrizas formadas pelas linhagens monocarióticas apresentaram manto de hifas circundando a raiz e rede de Hartig limitada à camada da epiderme, típica de ectomicorrizas de angiospermas. As percentagens de colonização, correspondendo ao número de ectomicorrizas em relação ao total de raízes laterais curtas, variaram de 23 a 62%. Algumas linhagens monocarióticas estimularam a formação de raízes laterais curtas, promovendo aumentos médios de 109% em comparação com o controle. A presença de alguns dos isolados no meio de síntese in vitro estimulou a produção de raízes laterais de maior diâmetro. As dimensões das raízes laterais e das ectomicorrizas variaram com o isolado inoculado, indicando variações dentro da população testada na capacidade de provocar mudanças morfológicas nas raízes da planta hospedeira. O dicário M5M11 apresentou maiores valores para produção de raízes laterais, número de ectomicorrizas e percentagem de colonização em comparação com os isolados monocarióticos correspondentes, M5 e M11, indicando a possibilidade de se selecionar isolados compatíveis eficientes para a produção de dicários superiores. O conjunto de isolados monocarióticos testado variou quanto à capacidade de colonização das raízes de E. grandis e de causar mudanças morfológicas nas raízes relacionadas ao metabolismo secundário, constituindo sistema-modelo para o estudo da genética, da fisiologia e dos processos morfogenéticos envolvidos na formação de ectomicorriza entre Pisolithus e Eucalyptus.

The formation of ectomycorrhizas by monokaryotic and dikaryotic isolates of Pisolithus microcarpus (Cooke & Massee) G. Cunn. in Eucalyptus grandis W. Hill ex Maid. was studied by in vitro synthesis in Petri dishes. The formation of ectomycorrhizas was observed for all strains tested. Ectomycorrhizas formed by the monokaryotic strains presented a sheath of hyphae around the roots and a Hartig net limited to the epidermis layer, typical of the angiosperm ectomycorrhizas. Colonization rates, a measure of the number of ectomycorrhizas in relation to the total number of lateral root tips, varied from 23 to 62%. Some monokaryotic strains stimulated the formation of lateral roots, promoting increases of up to 109% above the control. The presence of some of the isolates in the in vitro synthesis medium stimulated the production of thicker lateral root tips. The dimensions of the lateral roots tips and ectomycorrhizas varied from one isolate to the next, indicating a variation in their capacity to provoke morphological changes in the host plant roots. The dikaryotic strain M5M11 presented higher values for lateral root yield, number of ectomycorrhizas, and colonization percentage than the corresponding monokaryotic strains, M5 and M11. This indicated the possibility of selecting compatible performing monokaryotic isolates for the yield of superior dikaryotic strains. The set of monokaryotic strains tested varied greatly in their ability to colonize E. grandis roots and cause secondary metabolism-related morphological changes in roots, providing a wealth of model systems for the study of genetic, physiological, and morphogenetic processes involved in Pisolithus-Eucalyptus ectomycorrhiza formation.

O objetivo deste trabalho foi padronizar as condições de obtenção e regeneração de protoplastos de Epulorhiza repens e Ceratorhiza sp. Para o fungo E. repens, a maior produção de protoplastos, 8.0 x 10(6) protoplastos/mL, foi obtida em KCl 0.6 M, na presença de 15 mg/mL de "Lysing Enzymes" e micélio fúngico com 2 dias de idade. A maior freqüência de regeneração obtida foi de 8,5 % quando sacarose 0.5 M foi utilizada como estabilizador osmótico. Do total de protoplastos obtidos, 80 % eram nucleados e 20 % anucleados. Para Ceratorhiza sp., a maior produção de protoplastos, 4,0 x 10(7) protoplastos/mL, foi obtida em NaCl 0.6 M, na presença de 15 mg/mL de "Lysing Enzymes" e 15mg/mL de Glucanex, e micélio fúngico com 2 dias de idade. A maior freqüência de regeneração obtida foi de 6.7 % utilizando sacarose 0.5 M como estabilizador osmótico. Do total de protoplastos obtidos, 88.8 % eram nucleados e 1.2 % anucleados. O estabelecimento de protocolo otimizado para obtenção e regeneração de protoplastos dos fungos E. repens e Ceratorhiza sp. é importante, permitindo o estabelecimento de técnicas de transformação genética, o isolamento de mutantes, a determinação de cariótipo eletroforético e o cruzamento de linhagens.

The aim of this work was to study the standardization of conditions to obtain and regenerate Epulorhiza repens and Ceratorhiza sp. protoplasts. For E. repens, the largest number of protoplasts (8.0 × 10(6) protoplasts/mL) was obtained in 0.6 M KCl, using 15 mg/mL of Lysing Enzymes, and 2-day-old fungal mycelium. When 0.5 M sucrose was used as osmotic stabilizer, the highest frequency of regeneration was achieved (8.5 %); 80.0 % of protoplasts were nucleated, and 20.0 % anucleated. For Ceratorhiza sp., the largest number of protoplasts (4.0 × 10(7) protoplasts/mL) was achieved in 0.6 M NaCl, when 15 mg/mL of Lysing Enzymes and 15mg/mL of Glucanex, with 2-day-old fungal mycelium were used. The highest frequency of regeneration was 6.7 % using 0.5 M sucrose as osmotic stabilizer; 88.8 % of protoplasts were nucleated, and 11.2 % anucleated.

Fungos micorrízicos rizoctonioides Epulorhiza spp. têm sido isolados de orquídeas do gênero Epidendrum e vêm sendo utilizados na germinação simbiótica das sementes de orquídeas. Epidendrum secundum é uma orquídea largamente distribuída em campos de altitude do Parque Estadual da Serra do Brigadeiro (PESB), Minas Gerais, e pouco se sabe sobre a associação micorrízica dessa espécie nesse parque. O objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade morfológica dos fungos micorrízicos rizoctonioides isolados de quatro populações de E. secundum em três regiões de um campo de altitude localizado na subserra Totem Deitado, PESB. Vinte e seis isolados fúngicos foram obtidos, todos pertencentes ao gênero Epulorhiza. As características morfológicas qualitativas e quantitativas avaliadas revelaram, de modo geral, baixa variabilidade entre os isolados obtidos de uma mesma população e de populações localizadas na mesma região, porém grande variabilidade foi observada entre os isolados obtidos das populações de diferentes regiões. Com base nessas características morfológicas, os isolados foram divididos em quatro grupos: o primeiro constituído pelos fungos obtidos das populações I e II da região A, o segundo pelos fungos da população III da região B, o terceiro pelo isolado M61 da população II da região A, e o quarto pelo único isolado obtido na população IV da região C. A variabilidade morfológica observada é um indicativo da diversidade dos fungos Epulorhiza spp. associados a E. secundum no PESB.

Rhizoctonia-like mycorrhizal fungi Epulorhiza spp. have been isolated from orchids of the genus Epidendrum and have been used to promote the symbiotic germination of orchid seeds. Epidendrum secundum is a widely distributed orchid in campo de altitude (high elevation grassy vegetation) regions of the State Park of Serra do Brigadeiro (PESB), Minas Gerais, Brazil, and little is known about the mycorrhizal relationships of this species in the park. The objective of this study was to evaluate the morphological diversity of Rhizoctonialike mycorrhizal fungi isolated from four E. secundum populations growing in three regions of a campo de altitude, in the region of Totem Deitado Mountain, PESB. Twenty-six fungal isolates were obtained, all belonging to Epulorhiza. The quantitative and qualitative morphological characteristics revealed, in general, low variability among the fungi isolated from the same orchid population and among isolates from the same region, but high variability among the fungi isolated from the populations from different regions. Based on these morphological characteristics, the isolates were separated into four groups. The first consisted of the fungi from populations I and II from region A, the second of isolates from population III from region B, the third of isolate M61 from population II from region C, and the fourth of a single isolate obtained from population IV from region C. The morphological variability observed indicates the existence of diversity of Epulorhiza spp. associated with E. secundum in PESB.

O eucalipto apresenta ótimo crescimento em solo com baixa fertilidade, mas pouco se sabe sobre a participação das ectomicorrizas e de ácidos orgânicos na aquisição e no acúmulo de nutrientes pela planta em campo. A produção de ácido oxálico e sua relação com as concentrações de P, Ca, Mg e K foram avaliadas em ectomicorrizas e raízes laterais finas de híbrido de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla, de 2,5 anos de idade, na região de Viçosa, MG. A área de estudo apresenta topografia típica em meia laranja, de vertente côncavo-convexa. Foram também avaliadas as concentrações desse composto no solo rizosférico, não rizosférico e ectomicorrizosférico. As maiores percentagens de colonização micorrízica foram observadas na área de encosta, onde havia limitada disponibilidade de nutrientes e alta saturação de Al. As concentrações de ácido oxálico + oxalato corresponderam, em mg kg-1: folhas, 324,6; ectomicorrizas, 208,3; raízes laterais finas não colonizadas, 183,1. Já no solo, as concentrações foram maiores no solo ectomicorrizosférico, com 183,7 mg kg-1, seguido pelo solo rizosférico, com 134,3 mg kg-1, e pelo solo não rizosférico, com 76,0 mg kg-1. As maiores concentrações de ácido oxálico e P (p < 0,05) nas ectomicorrizas da área do topo, 117,3 mg kg-1 e 6,3 g kg-1, respectivamente, sugerem que as populações de fungos ectomicorrízicos nesta área têm papel importante na solubilização e disponibilização de nutrientes para o hospedeiro. Não foram observadas correlações positivas significativas entre a produção de ácido oxálico e as concentrações de Ca nas raízes laterais finas e nas ectomicorrizas de eucalipto.

Eucalypt is highly efficient at growing in nutrient-poor soils, but little is known about the role of ectomycorrhizas and organic acids in nutrient uptake and storage under field conditions. Oxalic acid production and its relationships with Ca, P, K, and Mg concentrations were evaluated in the ectomycorrhizas and fine lateral roots of a 2.5 year-old Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla hybrid grown in a mountainous area at Viçosa, MG, Brazil. Oxalic acid concentrations were also evaluated in rhizospheric, non-rhizospheric, and ectomycorhizospheric soil. Mycorrhizal colonization was highest in a slope area with limited nutrient availability and high Al saturation. The oxalic acid concentration was 324.6 mg kg-1 in the leaves; 208.3 mg kg-1 in ectomycorrhizas; and 183.1 mg kg-1in non-mycorrhizal fine lateral roots. The concentrations in the soil were highest in the ectomycorhizospheric soil, 183.7 mg kg-1, followed by the rhizospheric soil, 134.3 mg kg-1, and finally, by the non-rhizospheric soil, 76.0 mg kg-1. The highest oxalic acid and P concentrations in the ectomycorrhizas found in the hilltop area, 117.3 mg kg-1and 6.3 mg kg-1, respectively, suggest that the population of ectomycorrhizal fungi in this area plays an important role in nutrient solubilization and supply to the host plant. No significant positive correlations were observed between oxalic acid production and Ca concentrations in the fine lateral roots and ectomycorrhizas of the eucalypt trees.

O eucalipto é eficiente na aquisição de Ca do solo, mas pouco se sabe sobre a participação das ectomicorrizas e dos ácidos orgânicos nesse processo em campo. O acúmulo de cristais de Ca (CaOx) foi avaliado em, aproximadamente, 2.100 raízes laterais finas e ectomicorrizas do híbrido de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla, cultivado por 2,5 anos em área com topografia típica em meia laranja, com vertente côncavo-convexa, na região de Viçosa, MG. Técnicas de microscopia óptica e microscopia eletrônica de varredura foram usadas para a visualização dos CaOx. Em 73,7 % das raízes, ocorreu abundante acúmulo de drusas e grânulos de CaOx nas células do córtex. A presença conspícua de CaOx foi observada em 56,2 % das ectomicorrizas e em 17,5 % das raízes laterais finas não colonizadas, evidenciando o papel das micorrizas no acúmulo de Ca em eucalipto. A forma predominante dos CaOx foram as drusas nas ectomicorrizas e os grânulos cristalinos nas raízes. Os dez morfotipos de ectomicorrizas observados na área diferiram quanto à presença e à morfologia dos CaOx, o que pode representar distintas capacidades dos fungos ectomicorrízicos em fornecer Ca para a planta hospedeira. A análise da superfície do manto das ectomicorrizas por microscopia eletrônica de varredura não evidenciou a presença de CaOx nessa estrutura, confirmando que, nas condições avaliadas, o acúmulo de cristais limita-se ao córtex radicular. Este é o primeiro relato da ocorrência de CaOx em ectomicorrizas de eucalipto no Brasil, com dados que comprovam que há mecanismos de armazenamento de Ca nas ectomicorrizas em áreas com baixa disponibilidade do elemento.

Eucalypt is efficient at taking up Ca from the soil, however little is known about the contribution of ectomycorrhizas and organic acids to this process under field conditions. The accumulation of calcium oxalate crystals (CaOx) was evaluated in, approximately, 2,100 fine lateral roots and ectomycorrhizas of a 2.5-year-old Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla hybrid, grown in a mountainous area at Viçosa, MG, Brazil. Optical and scanning electron microscopy techniques were used for CaOx observation. Abundant accumulation of calcium as druses or grains in the root cortex cells was observed in 73.7 % of the fine lateral roots. The conspicuous presence of CaOx was observed in 56.2 % of the ectomycorrhizal and in 17.5 % of the nonmycorrhizal fine lateral roots, evidencing the role of the ectomycorrhizal association in calcium storage of eucalypt roots. In the ectomycorrhizal root, druses were the predominant CaOx form, while in nonmycorrhizal roots crystalline grains were more frequent. The 10 ectomycorrhizal morphotypes observed varied in relation to the CaOx content in the root cortex, possibly representing distinct capacities of each ectomycorrizal fungi to supply Ca to the host plant. The analysis of the mantle surface of the different ectomycorrhizal morphotypes by scanning electron microscopy did not detect the presence of CaOx in this structure, confirming that under the conditions evaluated, CaOx accumulation in the association is limited to the root cortex. This is the first report on the occurrence of CaOx in eucalypt ectomycorrhizas in Brazil, with data that demonstrate the existence of calcium storage mechanisms in the ectomycorrhizas in areas with low calcium availability.

No Brasil, as espécies Pinus elliottii e Terminalia ivorensis vêm sendo indicadas para reflorestamento. No entanto, pouco se sabe sobre as características ecológicas destas florestas, o ciclo de nutrientes e suas conseqüências sobre a produtividade e sustentabilidade sob condições tropicais. Visando melhor compreender a dinâmica do C nestes ecossistemas, objetivou-se neste trabalho avaliar a atividade microbiana do solo, serapilheira e da mistura solo + serapilheira em povoamentos florestais de P. elliottii e T. ivorensis. Amostras de solos e serapilheira foram incubadas e a atividade microbiana avaliada por meio da evolução de CO2. Ao final da incubação, a respiração acumulada foi superior para a serapilheira de T. ivorensis. Os demais substratos com serapilheira não diferiram entre si, mas diferiram do solo sob T. ivorensis, que, por sua vez, diferiu do solo sob P. elliottii. Nas condições testadas, a incorporação de solo à serapilheira, bem como a incorporação alternada de solo de um povoamento à serapilheira de outro, não promoveu aumentos significativos na respiração da serapilheira, mostrando que as características químicas da própria serapilheira alteram mais fortemente sua velocidade de degradação que as características químicas e microbianas do solo onde é incorporada.

In Brazil, the species Pinus elliottii and Terminalia ivorensis are being recommended for reforestation. However, little is known about the ecological characteristics of such forests, the nutrient cycle and possible consequences on yields and sustainability under tropical conditions. For a better understanding of the C dynamic in these ecosystems, this study aimed to evaluate the microbial activity of soil, litter, and the mixture of soil + litter in forest stands of P. elliottii and T. ivorensis. Samples of soil, litter and mixture were incubated and the microbial activity was evaluated on the basis of CO2 released. At the end of incubation, the accumulated respiration was significantly higher in litter of T. ivorensis. The other substrates with litter did not differ from each other, but differed from the soil under T. ivorensis, which in turn differed from soil under P. elliottii. In the tested conditions, the soil incorporation to litter, as well as the alternate incorporation of soil from one forest with the litter of another did not cause a significant increase in litter respiration. This indicates that the influence of the chemical characteristics of the litter itself on degradation speed is stronger than the chemical and microbiological characteristics of the soil where it is incorporated.

Os basidiósporos de Pisolithus sp. contêm grande quantidade de lipídeos, indicando provisão para futura germinação na rizosfera da planta hospedeira. No entanto, pouco se conhece a respeito do acúmulo, da composição e da mobilização dos lipídeos durante a formação e germinação dos esporos. Neste trabalho, o armazenamento de lipídeos e a análise da composição em ácidos graxos durante a basidiosporogênese foram estudados utilizando-se técnicas de microscopia de luz e cromatografia gasosa. O basidiocarpo fúngico apresentou abundantes corpos lipídicos no interior de suas hifas, basídios e basidiósporos. Esse fato evidencia considerável transporte de C dentro do basidiocarpo para suprir a demanda de C durante a formação dos esporos. A composição de ácidos graxos revelou a presença de 24 compostos com cadeias variando de 9 a 18 átomos de C, sendo tanto saturados ou contendo uma ou duas insaturações. A composição de ácidos graxos variou de acordo com o estádio de desenvolvimento dos peridíolos. Nos basidiósporos livres, os compostos predominantes foram 16:0, 16:1w5c, 18:1w9c e 18:2w6,9c/18:0ante, com concentrações de 76, 46, 192 e 51 µg g-1 do ácido graxo de matéria seca, respectivamente. Esses resultados indicam que o ácido oléico é o principal constituinte das reservas lipídicas nos basidiósporos de Pisolithus sp. Outros trabalhos estão sendo realizados para determinar os fatores que desencadeiam a mobilização de lipídeos durante a germinação de esporos.

The basidiospores of Pisolithus sp. contain large amounts of lipids, indicating provision for future germination in the host rhizosphere. However, the accumulation, composition, and mobilization of lipids during formation and germination of these spores are largely unknown. In this study, lipid storage and fatty acid composition during basidiosporogenesis were analyzed in fresh basidiocarps using bright-field microscopy and gas chromatography. Abundant lipid bodies are found in the hyphae, basidia, and basidiospores of fungal basidiocarps. This evidences a considerable C transport in the basidiocarp to meet the C demand during basidiospore formation. Fatty acid composition analysis revealed the presence of 24 compounds with chains of 9 to 18 C atoms, either saturated or insaturated, with one or two insaturations. The fatty acid composition and content varied according to the developmental stage of the peridioles. In free basidiospores, the predominant compounds were 16:0, 16:1w5c, 18:1w9c, and 18:2w6,9c/18:0ante, at concentrations of 76, 46, 192, and 51 µg g-1 dry matter, respectively. Our results indicate that oleic acid is the major constituent of lipid reserves in Pisolithus sp. basidiospores. Further studies are being conducted to determine the factors that induce lipid mobilization during spore germination.